BioximiaForYou

amylase

Alfa-amylase (diastase, alfa-1,4-glucan-4-glucanhydrolase) tilhører klassen af ​​hydrolaser, der katalyserer hydrolysen af ​​polysaccharider, herunder stivelse og glycogen, til dextriner og simple di- og monosaccharider (maltose, glucose).

Amylase i de største koncentrationer findes i henholdsvis bugspytkirtlen og spytkirtlerne - i form af bugspytkirtlen og spyt isoenzymer. Under fysiologiske forhold består serumamylase af 40% af pankreatisk amylase og 60% spyt amylase. Ved anvendelse af specifikke inhibitorer eller separation ved elektroforese er det muligt at fastslå oprindelsen af ​​enzymet til stede i plasmaet. Amylase fjernes fra plasmaet af nyrerne og udskilles i urinen. Dette fører til større informationsindhold, der bestemmer aktiviteten af ​​alfa-amylase i urinen som en test, der vurderer den funktionelle tilstand af bugspytkirtlen. Væksten af ​​amylaseaktivitet er af største betydning ved diagnosen af ​​pancreas sygdomme.

Klinisk og diagnostisk værdi:

Aktiviteten af ​​blodalfa-amylase og urin varierer meget i løbet af dagen.

Hyperamalasæmi - en forøgelse af aktiviteten af ​​amylase i blodserumet.

Ø Akut pancreatitis - maksimale værdier forekommer i de første 6-12 timer efter sygdoms symptomer. Efter denne tid nedsættes enzymaktiviteten, normaliseres i 2-5 dage. Hvis aktiviteten forbliver forøget i mere end 5 dage, indikerer dette en stigning i inflammation.

Ø Forværring i kronisk pankreatitis

Ø Perforering af duodenalsår

Ø Intestinal obstruktion

Ø Akut blindtarmbetændelse

Ø Alkaloider (morfin, heroin, kodein)

Ø Metanolforgiftning

Ø Store doser ethanol (til alkoholikere)

Hypoamylasæmi - et fald i aktiviteten af ​​amylase i blodserummet (praktisk talt ingen diagnostisk værdi).

Ø Pancreatisk nekrose

Ø Myokardieinfarkt

Hyperamalazuri - øget udskillelse af amylase i urinen.

Ø Akut pancreatitis - en stigning i enzymaktiviteten observeres i løbet af de første 24 timer med inflammation. Den øgede udskillelse af enzymet i urinen vedvarer i de næste 7 til 10 dage, på trods af at aktiviteten af ​​amylase i blodet efter 3-4 dage er normal.

Ø kræft i bugspytkirtlen

Ø Perforering af duodenalsår

Ø Galdesygdom

Ø Sygdomme i spytkirtlerne, parotitis, sten i spytkanalerne

Hypoamylase - et fald i frigivelsen af ​​amylase i urinen.

Ø Nyresygdom

Ø leversygdom

"Bestemmelse af alfa-amylaseaktivitet i biologiske væsker ved hjælp af den samlede Karavey-metode"

Princip: Under anvendelse af alpha-amylase hydrolyseres stivelse til dannelse af produkter, der ikke giver en farvereaktion med iod. Intensiteten af ​​faldet i farven af ​​jodstivelseskomplekset pr. Tidsenhed er proportional med enzymets aktivitet.

Det undersøgte materiale: frisk serum, urin.

Pakken indeholder:

Reagens №1 - buffer

Reagens nr. 2 - koncentreret substrat

Reagens №3 - koncentreret iod opløsning

Reagens nr. 4 - kaliumfluoridopløsning

Reagens nr. 5 - saltsyre

Fremstilling af reagenser til analyseproceduren:

Undergrundsarbejdsløsning: bland reagenser nr. 1 og nr. 2 i et forhold på 24: 1.

Arbejdsløsning af iod: bland destilleret vand, reagens nr. 3 og reagens nr. 4 i forholdet 7: 1: 2.

Arbejdsløsning af saltsyre: Fortynd indholdet af flaske nummer 5 med destilleret vand 16 gange.

Bestemmelsen:

reagens

Erfarne prøve

Kontrolprøve

BioXplorer

amylase

α-Amylase [α- (1,4) -glucan-4-glucanohydrolase, KF 3.2.1.1] er et enzym, der hydrolyserer de interne 1,4-a-glycosidbindinger af stivelse, glykogen og andre glucosepolymerer. Hos mennesker er de vigtigste kilder til a-amylase i bugspytkirtlen og spytkirtlerne. Talrige isoformer isoleret fra biologiske væsker og humane væv er sandsynligvis heterogene produkter af posttranslationelle ændringer af to familier af amylase-isoenzymer, hvis syntese er kodet af to loci af Atu-1 genet, spytkirtelsyre (C) amylase type og Atu-2, pankreas (P) type enzym, tæt forbundet med kromosom 1. Isoenzymerne C og P har ikke store forskelle i aminosyresammensætningen. To isoformer blev isoleret ved gelfiltrering på Sephadex i C-amylasefraktionen, hvoraf den ene indeholder carbohydrater. Molekylær masse af kulhydratholdige isoformer, 57 kDa, kulhydratfri - 55 kDa. Isoelektriske punkter af de vigtigste isoformer af C-isoamylaser fra 5,5 til 6,5. P-gruppen af ​​isoamylase har en lavere molekylvægt (53 kDa) og indeholder ikke kulhydrater. De isoelektriske punkter af disse proteiner spænder fra 5,7 til 7,0.

Overbevisende bevis for, at P-type amylase kun dannes i bugspytkirtlen er fraværet af dette isoenzym hos personer med total pankreathektomi. A-amylase C-isoenzymet kan derimod syntetiseres i forskellige organer og væv. Høj aktivitet af C-amylase er fastgjort i æggelederens væv og indholdet af æggestokkens cyste. Den specifikke gruppe af isoamylaser, der frembringes af væv fra de kvindelige kønsorganer, er ikke påvist i serum eller urin hos raske mennesker; fordelingen af ​​isoamylaser er identisk hos mænd og kvinder. Isoamylaser, der tilhører C-gruppen, findes også i modermælk og sårvæske.

Den kliniske betydning af at bestemme aktiviteten af ​​amylase i serumet.

Bestemmelse af serum α-amylase aktivitet er den mest almindelige test for diagnosticering af akut pancreatitis. Ved akut pancreatitis øges enzymaktiviteten i serum 3-12 timer efter et smertefuldt angreb, når det maksimale efter 20-30 timer og vender tilbage til normal med et gunstigt kursus inden for fire dage. Aktiviteten af ​​α-amylase (diastase) i urinen øges 6-10 timer efter en stigning i serumaktivitet og vender tilbage til normal, oftest tre dage efter en stigning.

Det er nu almindeligt kendt, at en stigning i den samlede aktivitet af a-amylase ikke er specifik for pancreatitis og andre sygdomme i bugspytkirtlen. Kliniske undersøgelser har vist, at en stigning i a-amylaseaktivitet forekommer i en række sygdomme, som omfatter intestinal obstruktion, galdevejssygdomme, appendicitis, parotitis og ektopisk graviditet. Sensibiliteten og specificiteten ved bestemmelse af a-amylase i diagnosen akut pancreatitis øges med ændringer i grænserne for normale værdier (normens diskriminerende niveau og patologi er en aktivitet 1,5-2 gange højere end normens øvre grænser). I dette tilfælde er bestemmelsen af ​​a-amylaseaktivitet den mest informative den første dag i udviklingen af ​​akut pancreatitis. Ifølge nogle forfattere har bestemmelsen af ​​serum-a-amylaseaktivitet ved kronisk pancreatitis ingen diagnostisk værdi.

I mennesker genabsorberer a-amylase, som passerer frit gennem filtreringsbarrieren af ​​de nyrede legemer, epithelcellerne i nyretubuli på samme måde som andre serummolekyler med lav molekylvægt. En stigning i serumamylaseaktivitet kan skyldes svækket enzymeliminering. Et eksempel er en tilstand kaldet makroamylasæmi, når et enzym er bundet til serumimmunoglobuliner og danner et makromolekylært kompleks. Et sådant kompleks filtreres ikke ind i urinen og kan ikke fjernes under anvendelse af andre mekanismer, hvilket fører til en signifikant og undertiden langvarig forøgelse af a-amylaseaktiviteten i blodserumet. Makroamylasæmi forekommer hos raske personer med en hyppighed på 1% hos personer med hyperamylasæmi med en frekvens på 2,5%. Makroamylasæmi kan diagnosticeres ved hjælp af ultracentrifugeringsmetoden, ESP, gelkromatografi, en simpel test af udfældningen af ​​komplekset med polyethylenglycol er også blevet foreslået.

Serum α-amylaseaktiviteten øges ofte ved nyresvigt, men det er ikke helt klart, hvad der forårsager denne stigning - en stigning i dannelsen af ​​et enzym eller et fald i dets eliminering. I sådanne tilfælde kan yderligere oplysninger gives ved bestemmelse af hastigheden af ​​a-amylase udskillelse eller beregningen af ​​enzym clearance.

Ifølge mange forfattere er den mest følsomme og specifikke test for diagnosen pancreatitis aktivitetsniveauet for P-isoenzym-a-amylasen. Denne test er af særlig betydning, hvis en normal samlet amylaseaktivitet findes i en patient med en formodet diagnose af pancreatitis. Ved nedsat P-amylase aktivitet kan kronisk pankreatitis diagnosticeres. Andelen af ​​P-isoamylase i den totale aktivitet af a-amylase er signifikant højere i urinen end i serum, muligvis på grund af forskelle i udskillelsen af ​​isoenzymer ved nyrerne. Ikke desto mindre er den diagnostiske værdi for at bestemme aktiviteten af ​​a-amylase-isoenzymer i urinen underordnet den i blodet.

Eksperiment - den grundlæggende metode for videnskab
Både observation og måling indgår i en så kompleks grundmetode for videnskab som eksperiment. I modsætning til observation er et eksperiment præget af en forskers intervention i stillingen af ​​de objekter, der studeres, ved en aktiv indflydelse på emnet.

Jord er en unik bestanddel af biosfæren
I slutningen af ​​det 19. århundrede. V. Dokuchaev, den store russiske naturforsker ved hans studier af chernozem og andre jordarter i den russiske dal og kaukasus, fastslog, at jordbunden er naturlige organer i deres ydre egenskaber og egenskaber af kræfter.

Urinanalyse
Urinalyse er en række kemiske og fysiske tests, hvis resultater viser prøvens specifikke tyngde og pH og tilstedeværelsen og niveauet af blod, glucose og andre bestanddele i prøven. Siden de grundlæggende data i kronisk nyresvigt og modtage.

amylase

a - Amylase (diastase, 1,4 - a - D - glucanhydrolase, EC 3.2.1.1.) katalyserer hydrolysen af ​​a - 1,4 - glucosidbindinger af stivelse, glycogen og deres beslægtede polysaccharider til maltose, dextriner og andre polymerer. Enzymernes molekylvægt er ca. 48.000 D. Molekylet indeholder et calciumatom, som ikke alene aktiverer enzymet, men beskytter det også mod proteasernes virkning, og amylaseaktiviteten øges med indflydelse af chlorioner. I blodet er det repræsenteret af to isoenzymer: pankreas - P-type og spytkirtel - S-type, som hver er opdelt i flere fraktioner. S-type isoenzym er generelt 45-70% (i gennemsnit 57%), resten er i P-typen. Begge isoenzymer har næsten identiske katalytiske og immunologiske egenskaber, afviger lidt i elektroforetisk mobilitet, men skilles godt fra ved gelfiltrering på DEAE - Sephadex. Der er også makroamylase, som ikke udskilles af nyrerne, men kan findes i normalt blodserum (ca. 1% af raske mennesker) og patologi (2,5%).

Høj amylaseaktivitet observeres i parotid og pankreas. Imidlertid findes dens aktivitet, selv om den er meget lavere, i de store og tyndtarm, skeletmuskler, lever, nyrer, lunger, æggeleder, fedtvæv. I blodet er enzymet forbundet med både plasmaproteiner og dannede elementer. Enzymeaktiviteten er den samme for mænd og kvinder og afhænger ikke af arten af ​​den taget mad og tidspunktet på dagen.

Eksisterende metoder til at studere aktiviteten af ​​a-amylase i biologiske væsker er opdelt i to store grupper:

1. Saccharifying (reduktometrisk), baseret på undersøgelsen af ​​sukkerne dannet af stivelse med den reducerende virkning af glucose og maltose.

2. Amyloklastisk, baseret på bestemmelse af resten af ​​uklart stivelse:

• i henhold til intensitetsgraden af ​​dens reaktion med iod. Disse metoder er mere følsomme og specifikke, men deres nøjagtighed afhænger i høj grad af stivelsens kvalitet og optimeringen af ​​bestemmelsesbetingelserne.
• viskositetssuspension af stivelse, har ikke høj nøjagtighed og anvendes ikke nu.

3. Metoder, der anvender kromogene substrater - er baseret på anvendelse af substrat-farvestofkomplekser, som under a-amylases virkning desintegreres til dannelse af et vandopløseligt farvestof.

4. Metoder baseret på koblede enzymatiske reaktioner:

Stivelse + H₂Om Maltose + Maltotriose + Dextrin

Maltose + N₂Ca. 2 Glucose

Glucose + ATP Glucose - 6 - F + ATP

Glucose-6-F + NADF-gluconat-6-F + NADFN

Aktiviteten af ​​enzymet bestemmes af akkumulationshastigheden af ​​NADPH.

To amyloklastiske metoder blev godkendt som forenet: Karavey (med resistent stivelsessubstrat) og Smith-Rohe.

Bestemmelse af amylaseaktivitet med farvet
substrat til rekrutteringsvirksomhed "Lachema"

princip

a - Amylase katalyserer hydrolysen af ​​et uopløseligt farvet stivelsessubstrat til dannelse af et blåt vandopløseligt farvestof. Mængden af ​​frigivet farvestof er proportional med enzymets katalytiske aktivitet.

Bestemmelse af alfa-amylaseaktivitet.

Alfa-amylase (diastase) er et enzym, der udfører den hydrolytiske spaltning af polysaccharider til dextriner, maltose og glucose. De endelige produkter af amylase giver ikke en farvereaktion med iod. Bukspyttkjertel og spytkirtler er rigeste i amylase. Amylase udskilles i blodet hovedsageligt fra disse organer.

Humant blodplasma indeholder hovedsagelig to typer amylase: pankreas og spytkirtel, den tredje type amylase er stor eller makroamylase. Med urin udskilles pancreasamylase hovedsageligt, hvilket er en af ​​grundene til, at urinamylasebestemmelsen er mere informativ end i blodet for at vurdere den funktionelle tilstand af bugspytkirtlen. Det antages, at 65% af urinamylaseaktiviteten skyldes pancreasamylase, mens 60% af den serumamylolytiske aktivitet tilvejebringes af amylasen af ​​spytkirtlerne. Ved akut pancreatitis øges pancreatisk amylase i serum til 89% og i urin til 92% uden at ændre salivkirtlen amylaseindeks.

Aktiviteten af ​​amylase i blodet og urinen undergår væsentlige ændringer i løbet af dagen, såvel som individuelle forskelle bemærkes. Fluktuationer af amylaseaktivitet gør det nødvendigt at studere i den daglige urin for at vurdere pancreasfunktionen.

Eksisterende metoder til bestemmelse af a-amylaseaktiviteten er opdelt i 2 grupper:

1. Endpoint-metoden er baseret på bestemmelse af resten af ​​ufordøjet stivelse i henhold til intensitetsgraden af ​​dens reaktion med iod (Karavey-metoden).

2. Den kinetiske metode.

serum a-amylase - 16-30 g / h * l

urin a-amylase - 28-160 g / h * l

1. Serum bør ikke hæmmes.

2. Forsøgsbetingelserne er af stor betydning, især den eksakte incubationstid på 5 minutter, så det anbefales ikke at foretage en samtidig undersøgelse af mere end 5 sera.

3. Bestemmelsen af ​​a-amylaseaktiviteten i urinen udføres på samme måde som bestemmelsen i blodet, men i tilfælde af hyperamylase anbefales det at fortynde urinen med efterfølgende omberegning.

4. Aktiviteten af ​​a-amylase påvirkes af stoffer - antibiotika, smertestillende midler og også alkohol.

En forøgelse af aktiviteten af ​​amylase forekommer hovedsageligt i sygdomme i bugspytkirtlen.

Ved akut pankreatitis øges enzymets aktivitet i blodet og urinen med mere end 10 gange. Hyperamalasæmi forekommer umiddelbart efter sygdomsbegyndelsen, når maksimalt 12-24 timer, hvorefter enzymaktiviteten hurtigt falder og kommer til normal i 2-6 dage. Typisk holder hypramilazuri længere end stigningen i enzymaktiviteten i serum, og derfor er det mere informativt at fastslå aktiviteten af ​​a-amylase i urinen i 2-3 dage efter et smertefuldt angreb.

Ved kronisk pankreatitis, kræft i bugspytkirtlen er stigningen i enzymaktivitet ikke så signifikant. Derudover kan der forekomme en lille stigning i enzymaktivitet i sygdomme ledsaget af et lignende klinisk billede med akut pancreatitis: akut blindtarmbetændelse, peritonitis, perforeret mavesår mv.

Derfor tillader udtalt amylasæmi at differentiere akut pancreatitis fra kroniske sygdomme i bugspytkirtlen, såvel som fra andre akutte sygdomme i bughulen.

Næsten altid amylasæmi ledsages af amylazuria. Men bestemmelsen af ​​urinamylaseaktivitet er en mindre nøjagtig diagnostisk indikator, da frigivelsen af ​​amylase i urinen er forbundet med nyrefunktion. En lille stigning i amylase i blodet, mens dets niveau reduceres i urinen, kan forklares ved en overtrædelse af nyrefunktionsfunktionen.

Et fald i amylaseaktivitet observeres med nekrose i bugspytkirtlen, leversygdomme (hepatitis, cirrose), omfattende forbrændinger, diabetes mellitus, kakeksi mv.

194.48.155.252 © studopedia.ru er ikke forfatteren af ​​de materialer, der er indsendt. Men giver mulighed for fri brug. Er der en ophavsretskrænkelse? Skriv til os | Kontakt os.

Deaktiver adBlock!
og opdater siden (F5)
meget nødvendigt

Amylasebestemmelse i biologiske væsker

Amylase i blodet og hvad er niveauet af denne indikator er normalt

• Hvad er dette enzym
• Metoder til bestemmelse af
• norm
• Årsagerne til stigningen
• lav læsning

En af de vigtige komponenter i den biokemiske analyse af blod er undersøgelsen af ​​dens enzymatiske aktivitet. Dette bestemmer plasmakoncentrationen af ​​forskellige enzymer, der hovedsageligt produceres af visse organer. Denne type specificitet gør det muligt for dem at blive anvendt som diagnostiske kriterier for et smalt udvalg af sygdomme. I denne artikel vil vi diskutere en sådan indikator som amylasehastigheden, der henviser til specifikke markører for pankreaspatologi.

Hvad er dette enzym

I mange år kæmper det med succes med hypertension?

Instituttets leder: "Du vil blive overrasket over, hvor nemt det er at helbrede hypertension ved at tage det hver dag.

Alfa-amylase anses for at være et af enzymerne af pancreasjuice (pancreas), som er aktivt involveret i fordøjelsesprocessen. Den produceres af eksocrine celler, og gennem udskillelseskanalerne kommer ind i tolvfingertarmen, hvor det er ansvarligt for opdeling af komplekse kulhydratkomponenter til enklere. De er involveret i nedbrydning af glykogen og stivelse. Slutresultatet af deres handling bør være produktionen af ​​simpel glukose, som forbruges af kroppen for at tilbagebetale cellernes energibehov.

Men amylase bør udelukkende strømme ind i tarmlumen. Normalt går en lille mængde ind i det systemiske kredsløb, da hver celle i vitalitetsaktiviteten har direkte kontakt med blodet. Så længe integriteten af ​​bugspytkirtlen ikke krænkes, overstiger enzymets koncentration ikke grænserne for normen. Blodamylase på grund af dens høje enzymatiske aktivitet, der påvirker ethvert væv i kroppen, kan forårsage deres ødelæggelse. Derfor bør mængden opretholdes på et konstant niveau.

Til behandling af hypertension bruger vores læsere med succes ReCardio. Ser vi på dette værktøjs popularitet, har vi besluttet at tilbyde det til din opmærksomhed.
Læs mere her...

Metoder og analyser til bestemmelse af blodamylaseaktivitet

Amylase i blodet cirkulerer på denne måde: enzymet udskilles af glandulære pankreaseceller, kommer ind i blodet og bæres til alle skibe. I leveren er den delvist neutraliseret. Den del af enzymet, som ikke har tid til at falde sammen, passerer gennem nyretilfiltret, hvor det er koncentreret og udskilles i urinen. Denne mekanisme er grundlaget for bestemmelse af koncentrationen af ​​alfa-amylase i forskellige biologiske væsker.

De vigtigste analyser omfatter:

• Biokemisk analyse til bestemmelse af alfa-amylase i blodet;
• Biokemisk analyse af urin til bestemmelse af urinamylase (analyse af diastase).

I klinisk praksis anvendes den anden metode ofte, da det er teknisk meget lettere at udføre og ikke kræver blodprøvetagning. Derudover er det mere følsomt og specifikt. I et stabilt stort volumen blod og ekstracellulær væske er enzymet i en mere fortyndet tilstand end i en lille mængde urin. Derfor er amylaseaktiviteten af ​​urin flere gange højere end blodplade.

Normal ydeevne

Evaluering af analysens resultater skal sammenlignes med visse standarder. Det er vigtigt at overveje, at normen indebærer en vurdering i visse måleenheder. Derfor skal du være opmærksom på de tegn, der er angivet efter tallene i kolonnen med analyseresultater. Desuden kan hastigheden af ​​amylase, som bestemt i forskellige laboratorier, afvige på grund af anvendelsen af ​​reagenser med forskellig følsomhed. Normalt er prisen angivet ved laboratoriet ved siden af ​​resultatet.

De generelt accepterede standardindikatorer for diastase og alfa-amylase i tabellen.

Biokemi, som bestemmer blodets amylaseaktivitet, er kendetegnet ved, at amylasehastigheden hos kvinder og mænd er identisk. Kønshormoner har ingen signifikant effekt på dette enzym.

Årsager og mekanismer til at øge indikatoren

Den korrekte fortolkning af resultaterne af analyser for at bestemme koncentrationen af ​​amylase i plasma eller urin kan virkelig hjælpe med at diagnosticere en række sygdomme. I klinisk praksis er de hyppigst forekommende situationer, hvor amylase eller diastase er forhøjet. Dette viser, hvad der opstod:

• Forhøjet sekretorisk aktivitet af bugspytkirtlen;
• Tilstedeværelsen af ​​forhindringer i bugspytkirtelkanalerne eller deres kompression, hvilket komplicerer udstrømningen af ​​bugspytkirtelsaft, der indeholder amylase;
• Bekymring af bugspytkirtelvæv er en traumatisk, inflammatorisk, nekrotisk (destruktiv) eller neoplastisk proces.

Derfor henviser en stigning i blodalfa-amylase og urindiastase til specifikke markører for sådanne sygdomme i bugspytkirtlen og dets kanaler:

1. Med forværring af kronisk pankreatitis
2. Med akut pankreatitis, fokal pankreatisk nekrose (selvdestruktion af kirtelsvæv ved enzymer), peripankreatisk infiltration eller i de indledende stadier af svær pankreatisk nekrose;
3. Kræft i bugspytkirtlen. Amylasehastigheden overskrides i større grad, når tumoren er placeret i organets hoved og krop;
4. Forskellige typer af kolelithiasis med koledocholithiasis (migration af sten i galdekanalerne);
5. Nederlaget for duodenumets store duodenale brystvorten i form af stenotisk papillitis, kileformede sten og kræfttumorer.

Forøget amylaseaktivitet i andre sygdomme og tilstande

Nogle gange skal man stå over for situationer, hvor der ikke er nogen indlysende problemer med bugspytkirtlen, men indikatorerne for alfa-amylase og diastase går ud over det normale interval. Det betyder at der er:

• Fejl i kosten;
• Brug af alkoholholdige drikkevarer;
• Forværring af kronisk cholecystitis og inflammatorisk proces i leveren;
• Ektopisk graviditet
• Inflammatoriske destruktive sygdomme i abdominale organer (perforeret sår, appendicitis, peritonitis, intestinal obstruktion og andre);
• Virale infektioner ledsaget af polyglandulitis (flere inflammatoriske ændringer i næsten alle spytkirtel og bugspytkirtlen). Det sker med parotitis, cytomegali og Epstein-Barr virus infektion.

lav læsning

Dekryptering af test, hvis resultater registrerede et fald i blodets amylaseaktivitet, kræves sjældent. Men stadig, nogle gange må du se det. Dette er muligt med:

• Komplet eller næsten fuldstændig ødelæggelse af bugspytkirtlen som følge af pankreas nekrose;
• Cancer transformation af hovedparten af ​​bugspytkirtlen, hvor der praktisk talt ikke er normale celler med bevarede funktionelle evner;
• Fjernelse af hele eller subtotale resektion af bugspytkirtlen;
• Genetiske lidelser af enzymaktiviteten i kroppen (cystisk fibrose).

Niveauet af amylase i blodet og urin diastasen er et pålideligt flagskib, der angiver retningen af ​​den diagnostiske vej for sygdomme i bugspytkirtlen. Korrekt vurdering af test i kombination med sammenligningen af ​​resultaterne af andre typer forskning giver lille chance for, at en række sygdomme bliver ubemærket.

Klinisk og diagnostisk værdi til bestemmelse af alfa-amylaseaktiviteten

I blod og urin

Aktiviteten af ​​blodalfa-amylase og urin i løbet af dagen (såvel som fra en dag til en anden) varierer betydeligt. Derudover blev signifikante individuelle forskelle mellem disse indikatorer observeret i forsøgspersonerne uden fordøjelsesorganernes patologi. I betragtning af svingningerne i udskillelsen af ​​alfa-amylase i urinen anbefales det at undersøge enzymets aktivitet i urinen opsamlet dagligt.

Ændringer i aktiviteten af ​​alfa-amylase i blodet og urinen opstår under graviditeten. Hyperamylasemia. Alfa-amylaseaktiviteten øges signifikant med sygdomme i bugspytkirtlen. Ved akut pankreatitis øges enzymets aktivitet i blodet og urinen 10-40 gange. Hyperamylasæmi forekommer ved sygdomsudbruddet, når maksimalt 12-24 timer efter udvikling, falder derefter hurtigt og kommer til en norm med 2-6 dage.

Aktiviteten af ​​enzymet kan øges i en række sygdomme, der har et lignende klinisk billede med akut pancreatitis, nemlig: akut appendicitis, peritonitis og perforeret mavesår og duodenalsår. Hos patienter med peritonitis er en stigning i amylaseaktivitet en konsekvens af udviklingen af ​​amylase-dannende bakterier. Normalt øges enzymets aktivitet i disse patologiske tilstande med 3-5 gange.

Sygdomme, som forårsager en forholdsvis lille hyperamylasæmi af ikke-pancreatisk oprindelse (dvs. uden direkte påvirkning af selve bugspytkirtlen) indbefatter cholecystitis, cholelithiasis, en tilstand forbundet med galdeblærersprængning, nyresygdom, nyresvigt, metastaser af en kræfttumor i lungerne og spytkirtelskader. med obturation af deres kanaler (klart klinisk billede af parotitis gør det nemt at forklare hyperamylasæmi), prostatitis, traumatisk hjerneskade, traumatisk shock, forbrændinger, lungebetændelse, diabetisk ketoacidose, abort, postoperativ periode.

Alfa-amylaseaktiviteten i serum øges også med esophageal perforation, mavesår, gastritis, akut tarmobstruktion, iskæmi og infarkt i tyndtarmen, peritonitis, ruptur af røret under ektopisk graviditet, salpingitis, aorta-aneurisme.

Hovedårsagerne til hyperamylasæmi er: nedsat udskillelse fra kirtler (alfa-amylaseproducenter), øget permeabilitet af den histohematogene barriere i kirtlerne, vævsnekrose, svækket enzymfrigivelse gennem nyretilfiltret.

Nogle andre hormoner og mange farmakologiske stoffer, hovedsageligt de midler, der fører til reduktion af Oddins sphincter, forårsager adrenalin: adrenalin, histamin, secretin, furosemid, salicylater, antikoagulanter, morfin, pantopon, opium, codein, tetracyclin og også alkohol.

På trods af at hyperamylasæmi næsten altid ledsages af peramylazuri, kan bestemmelsen af ​​urin-alfa-amylaseaktivitet ikke altid være en nøjagtig diagnostisk indikator, da frigivelsen af ​​amylase i urinen er forbundet med nyrefunktion. Derudover udskilles nyrerne kun 24% af amylasen udskilt af fordøjelseskirtlerne fra blodet.

Undersøgelsen af ​​alfa-amylaseaktivitet i daglig urin er en mere pålidelig biokemisk test til påvisning af en sygdom i bugspytkirtlen end en undersøgelse baseret på analyse af en enkelt del af den. Efter aktiviteten af ​​blodalfa-amylase efter et angreb af pankreatitis vender tilbage til det normale, kan det forblive forhøjet i urinen i op til 7 dage.

Koefficienten "blodalfa-amylaseaktivitet / urin alfa-amylaseaktivitet" er en indikator for det funktionelle anvendelighed af nyrfilteret.

Hypoamylamin i klinisk praksis er sjælden. Det observeres hos patienter med leversygdomme (hepatitis, cirrose), ondartede tumorer (især i nærvær af metastaser i leveren), omfattende forbrændinger, hud, diabetes, hypothyroidisme, almindelige spiseforstyrrelser, vægttab, cachexi og også under påvirkning af forgiftning ( for eksempel i tilfælde af toksici hos gravide kvinder). Et fald i alpha-amylaseaktiviteten indikerer oftest den utilstrækkelige eksokrine funktion i sub-gastrisk kirtel. Indførelsen af ​​citrater og oxalater fører til et fald i enzymaktiviteten.

Bestemmelse af total lactat dehydrogenase aktivitet

Lactat dehydrogenase (L-lactat; NAD-oxidoreduktase, EC 1.1.1.27) er et glycolytisk (cytosolisk zinkholdigt) enzym (molekylvægt 135.000 D), der reversibelt katalyserer oxidationen af ​​L-lactat til pyruvinsyre. En uundværlig deltager i denne reaktion er et oxideret nikotin-adenin-dinukleotid, der anvendes som en cofaktor af enzymet, der spiller rollen som en hydrogenacceptor.

Reaktionen katalyseret af lactat dehydrogenase kan repræsenteres som følger:

SNSNONSOO "+ OVER + Lactat dehydrogenase SNSSOSOO '+ OVER • H + H +

Enzymet er bredt fordelt på mennesker. I overensstemmelse med graden af ​​nedsættelse af enzymaktivitet kan organer og væv arrangeres i følgende rækkefølge: nyrer, hjerte, skeletmuskler, bugspytkirtel, milt, lever, lunger, blodserum. I sidstnævnte er der fundet flere forskellige proteiner (isoenzymer), der besidder de enzymatiske katalytiske egenskaber. Ændringer i strukturen af ​​proteindelen af ​​isoenzymerne bestemmer deres forskellige fysisk-kemiske egenskaber (især forskelligt elektroforetisk mobilitet i agar, stivelse, polyacrylamid og andre geler).

I plasma (serum) af blod blev fem lactat dehydrogeaza-isoenzymer - LDG1, LDG2, LDGz, LDG4, LDG5 - identificeret, som er placeret i gelen i faldende rækkefølge af deres elektroforetiske mobilitet.

Hver af isoenzymerne er en tetramer dannet af underenhederne H og M. Det er blevet fastslået, at LDH1 fraktionen hovedsageligt er afledt af hjertevævet, LDH5 - fra leveren. LDH i cytoplasma af celler og serum er repræsenteret af 5 isoenzymer.

M-underenheden findes hovedsageligt i væv med anaerob metabolisme, mens H-underenheden er til stede i væv med overvejende aerobiske processer. Metoden for elektroforese på bærere hjælper med at opdele alle 5 LDH-isoenzymer, som repræsenterer følgende procentandel i blodserum hos raske mennesker: LDH; (14-26%), LDH ^ (29-39%), LDH'er (20-26%), LDH4 (8-16%), LDH'er (6-16%) - V.N. Titov et al. (1988).

Lactat dehydrogenase er ikke kun indeholdt i plasma, men også i signifikante mængder i røde blodlegemer, så det serum, der anvendes til analysen, skal være frisk uden nogen hæmolyse.

Metoder til bestemmelse af LDH's totale aktivitet er opdelt i to hovedgrupper: 1) Kinetisk, baseret på Warbur-optisk test (optisk effekt associeret med omdannelsen af ​​NAD til NAD • N og omvendt) og 2) metoder, der bestemmer mængden af ​​dannet produkt eller forbrugt substrat efter en fast inkubationsperiode (slutpunktsmetoder).

Arbejde nr. 32 Colorimetrisk dinitrophenylhydrazinmetode til bestemmelse af laktatdehydrogenaseaktiviteten i blodserum (ifølge Sevel og Tovarek)

Princippet om metoden. L-lactat i et alkalisk medium i nærvær af serum LDH og tilsat NAD oxideres til pyruvat. I overensstemmelse med graden af ​​dens dannelse og bedømt på enzymets aktivitet.

reagenser

1. 0,45 mol / l opløsning af natriummælksyre. I en volumetrisk kolbe med en kapacitet på 100 ml tilsættes 5 ml mælkesyre i en koncentration på 800 g / l og 10 ml mælkesyre i en koncentration på 400 g / l og neutraliseres med en 2 N opløsning af natriumhydroxid til en svagt alkalisk reaktion med en pH på 7,5 (ved anvendelse af phenolphthalein bør udvikles en svag lyserød farve). Volumener bringes til mærke med destilleret vand.

2. 0,03 mol / l opløsning af natriumpyrophosphat, pH 8,8. I en volumetrisk kolbe med en kapacitet på 500 ml bidrager 6,69 g Na₂ P₂O₅ • N₂Ca. 50 ml diæt af fortyndet vand blandes blandingen grundigt, og opløsningens pH justeres til 8,8 med 1 N HCI-opløsning. Indholdets indhold af kolben justeres til mærket med destilleret vand. Reagenset er stabilt i en måned, når det opbevares i køleskabet.

3. Løsning NAD. 3 mg NAD (kemisk ren) opløses i 1 ml destilleret vand (med en hastighed på 0,6 mg pr. Prøve). Reagenset er stabilt i 4 uger, når det opbevares i køleskabet.

4. En opløsning af 2,4-dinitrophenylhydrazin. 19,8 mg 2,4-dinitrophenylhydrazin opløses i et lille volumen 1N saltsyreopløsning ved opvarmning af blandingen i et vandbad. Efter afkøling justeres volumenet til 1 ml med 1 N saltsyre. Den næste dag filtreres reagenset. Opløsningen opbevares i en skål af mørkt glas, det kan bruges i et år.

5. 0,4 n natriumhydroxidopløsning.

6. 1 n saltsyreopløsning.

7. Standardopløsning af pyrodruesyre natrium. 11 mg krystallinsk natriumpyruvsyre opløses i en lille mængde destilleret vand, overføres til en 100 ml målekolbe, og opløsningens opløsning gøres op til mærket med destilleret vand. 1 ml opløsning indeholder 110 μg natriumpyruvat, hvilket svarer til 88 μg pyrodruesyre. Arbejdsstandardopløsningen fremstilles ved at fortynde hovedet 10 gange med destilleret vand. I 1 ml af en arbejdsløsning af 8,8 μg pyruvsyre.

Forløbet af beslutsomhed. 0,1 ml serumfortyndet 1: 2 blandes med 0,3 ml NAD-opløsning og opvarmes i 5 minutter ved 37 ° C. Derefter opvarmes 0,8 ml phosphorsyreopvarmning og 0,2 ml natriummælksyreopløsning, der tidligere er opvarmet til 37 ° C Blandingen inkuberes ved 37 ° C i 15 minutter. Efter inkubation fyldes prøven med 0,5 ml 2,4-dinithophenylhydrazin og opbevares ved stuetemperatur i 20 minutter. Derefter tilsættes 5 ml natriumhydroxidopløsning, bland indholdet af røret og efter 10 minutter

Absorption måles i bølgelængdeområdet fra 500-560 nm, for eksempel ved en PEC med et grønt lysfilter i en kuvette med en lagtykkelse på 10 mm. Optag den optiske densitet af prøven under hensyntagen til absorptionskontrollen.

Kontrolprøven sættes på samme måde som eksperimentet, men fortyndet 1: 2 serum tilsættes efter inkubering af blandingen. Beregn enzymets aktivitet i overensstemmelse med kalibreringsgrafen. Aktiviteten af ​​lactat dehydrogenase udtrykkes i mmol pyruvsyre, som dannes ved inkubering af 1 liter serum i 1 time ved 37 ° C.

For at få dataene til at oprette en kalibreringsgraf, skal du gøre følgende. Fra en arbejdsstandardopløsning af natriumpyruvinsyre fremstilles en række fortyndinger (tabel 2). Hæld derefter 0,5 ml opløsning af 2,4-dinitrophenylhydrazin i rør. Dernæst behandler standardprøver på samme måde som erfarne.

Ved tilsætning af kontrolprøven tilsættes 0,6 ml destilleret vand, 0,8 ml pyrophosphatopløsning og 0,5 ml 2,4-dinitrophenylhydrazinopløsningen til røret. Dernæst behandles prøven tilsvarende oplevet.

For at finde indikatorer for lactat dehydrogenaseaktivitet i dimensionen "mmol pyruvsyre pr. 1 liter serum pr. 1 time inkubation ved 37 ° C" multipliceres antallet μmol pyruvinsyre i standardprøven med en faktor på 120 eller mængden af ​​μg pyruvinsyre - med 1,41.

For at udtrykke enzymets aktivitet i enheder af den nye dimension kan du anvende en anden formel:

Lactat dehydrogenaseaktivitet i mmol / (h • l) = C • 120: 88,

hvor C er mængden af ​​μg pyruvinsyre i prøven, er 120 konverteringsfaktoren for μg pyruvinsyre i mg, 88 er faktor til omdannelse af indikatorer fra mg til mmol.

Ved konstruktion af en kalibreringsgraf på abscissaaksen udtrykkes enzymaktivitetsværdierne, udtrykt i dimensioner, mmol DCH • 1) og præsenteres i den sidste kolonne i tabel 33. Et retlinieforhold mellem koncentrationen af ​​pyruvinsyre og optisk densitet er fra 0 til 10 mmol / (h) 1).

Klinisk og diagnostisk værdi ved bestemmelse af amylaseaktivitet

Amylase er et enzym, der bryder ned stivelse og glykogen. bugspytkirtlen og spytkirtlerne er de rigeste. Serumamylaseindhold er forbundet med fødeindtag: I løbet af dagen er aktiviteten højere end natten.

Virkningen af ​​amylase i serum forøger (hyperamylasæmi) med:

Akut pancreatitis (10-30 gange, der kommer til normal i 6-7 dage, hvis aktiviteten forbliver forøget i mere end 5 dage, dette indikerer udviklingen af ​​en kronisk proces);

Forværring af kronisk pankreatitis

Parotitis (betændelse i spytkirtlerne);

Kan være forårsaget af alkohol, adrenalin, medicin.

Et fald i aktiviteten af ​​amylase i serum (hypoamylasæmi) observeres, når:

Leversygdomme (hepatitis, obstruktiv gulsot, cirrose);

Øget aktivitet i urinen (hyperamlase) observeres, når:

Akut pancreatitis (har en større diagnostisk værdi end definitionen i serum, da den varer mere end 7 dage);

Faldet i enzymaktivitet i urinen (hypoamylase) observeres, når:

Besvar spørgsmålene:

Navngiv lokaliseringsstedet, den optimale pH og den biologiske værdi af amylase.

Skriv den reaktion, som amylase katalyserer.

Hvilken klasse af enzymer amylase?

* Hvad er de vigtigste sygdomme præget af øget aktivitet af amylase. Forklar årsagen.

* Fortæl os om årsager, typer, laboratoriediagnose og forebyggelse af pancreatitis.

3.8. Praktisk arbejde "Bestemmelse af serumaminotransferaseaktivitet".

Målene med praktisk arbejde:

at studere den kliniske og diagnostiske værdi ved bestemmelse af serumaminotransferaser;

lær at bestemme aktiviteten af ​​aminotransferaser i serumet.

Opgaver til selvstændigt arbejde:

Skriv i en notesbog princippet og metoden for det praktiske arbejde.

Udstyre en arbejdsplads til praktisk arbejde.

Gør praktisk arbejde.

Lav de nødvendige beregninger.

Udfyld analyserapporten. Vurder resultaterne.

Lav en konklusion om arbejdet og tegningerne.

Besvar yderligere spørgsmål.

Som et resultat af transaminering, som forekommer under aktionen af ​​AsAT og AlAT, dannes oxaloeddikesyre og pyrodruesyrer. Når en opløsning af 2,4-dinitrophenylhydrazin tilsættes, ophører den enzymatiske proces, og pyruvsyrehydrazoner optræder. I et alkalisk medium giver de farvning, hvis intensitet er proportional med mængden af ​​dannet pyruvsyre.

1. Referenceopløsning natriumpyruvinsyre - 2 mmol / l.

2,4-dinitrophenylhydrazin - 1 mmol / l.

3. Natriumhydroxid - 0,4 n..

4. Substrate AsAT / Alat.

2. FEC, kuvetter pr. Cm.

4. Testrørstativ.

5. Pipetter til 1 og 5 ml.

Gennemfør en undersøgelse af aktiviteten af ​​aminotransferaser i serum ifølge tabellen.

Diagnostisk værdi af bestemmelse af serumamylaseaktivitet

Hos mennesker udskilles alfa-amylase af bugspytkirtlen og spytkirtlerne. Den lille aktivitet findes i vævene i lever- og skeletmusklerne. Molekylmassen af ​​alfa-amylase er forholdsvis lav; i modsætning til de fleste enzymer filtreres den i nyrernes glomeruli og er indeholdt i urinen. Alfa-amylase består af to isoenzymer: pankreas type (P-type) og spytkirtel (S-type). Hos raske mennesker tegner sig serum for ca. 70% af den amylolytiske aktivitet i spyt isoenzym; i urinen er omkring samme procentdel iskramylase i bugspytkirtlen.

Hyperamilasæmi og hyperamalazuri ses hos mange sygdomme, men er mest udtalte ved akut pancreatitis, hvor aktiviteten øges hovedsageligt (op til 90% eller derover) på grund af bugspytkirtlenesoenzym. Med denne sygdom blev den højeste mængde amylase i blodet og urinen noteret i de første 1-3 dage. Viral hepatitis og kræft i bugspytkirtlen forårsager også bugspytkirtlen hyperamilazuri af bugspytkirtlen.

Ved ikke-pancreatisk hyperamylasæmi indbefatter spytkirtelskader, nyresvigt. Årsagerne til forhøjelsen af ​​b-amylase i blodet er nedsat udskillelse af kirtler, der indeholder b-amylase, utilstrækkelighed af nyres udskillelse af amylase fra kroppen.

Mange farmakologiske stoffer, kortikosteroider, salicylater, tetracyclin, furosemid, histamin forårsager hyperamalasæmi. For b-amylase er blod karakteriseret ved brede intra- og interindividuelle variationer. Den mest informative er definitionen af ​​pancreasisoamylase.

Ændringen i aktiviteten af ​​alfa-amylase i patologi.

Bestemmelsen af ​​alfa-amylaseaktiviteten erhverver klinisk og diagnostisk værdi ved diagnosticering og overvågning af sygdomme i bugspytkirtlen, fordøjelsessystemet, beskadigelse af bukhuleorganernes organer. I nogle tilfælde (for eksempel i sygdomme i bugspytkirtlen) er aktiviteten af ​​kun ét isoenzym, alv-amylase i pancreas, af diagnostisk betydning; Når man overvåger sygdomme i fordøjelseskanalen, er det nødvendigt at sammenligne enzymaktiviteten i serum (sekretorisk aktivitet og yderligere absorption fra maveskavheden) og urin (ofte er amylazuria-graden mere stabil og langvarig indikator end amylasæmi).

Forhøjede alfa-amylaseaktivitetsværdier observeres med:

Inflammatoriske pankreasygdomme (akut, hævet, kronisk, reaktiv pankreatitis). Hyperamylasæmi er normalt akut (10-40 gange højere), men ofte er kortvarig hyperamylase også signifikant, men niveauet af alfa-amylase i urinen falder langt langsommere end i blodplasma (serum). Denne egenskab er praktisk at bruge, når "sent" diagnostisk undersøgelse af en patient med kliniske tegn på pancreatitis. For at overvåge processen er enzymaktiviteten sædvanligvis målt i begge biologiske væsker. Det skal bemærkes, at alvorlige former for læsioner i bugspytkirtlen med truslen om vævsnekrose såvel som pancreatitis ledsaget af alvorlige lidelser i lipidmetabolisme kan ledsages af en reel eller falsk (på grund af amylasehæmning ved triacylglycerider) fald i enzymaktivitet. Hvis der formodes at forekomme nogen form for pancreatitis, er det derfor diagnostisk vigtigt ikke alene at bestemme alfa-amylaseaktiviteten i urinen og serumet, men også at beregne amylazo-kreatininclearance med formlen:

Ved akut pankreatitis overstiger denne beregnede værdi 6%. Beregning af clearance giver dig mulighed for ikke at korrigere mængden og tidspunktet for urinopsamlingen og gør resultatet mindre afhængigt af de anvendte metoder til bestemmelse.

Sygdomme i bukhulen, med lignende symptomer med akut pancreatitis: akut appendicitis, peritonitis, perforeret mavesår og duodenalsår. Alfa-amylaseaktiviteten øges med ca. 3-5 gange, sjældent ved 10 gange. Hovedårsagen til hyperæmiæmi er ikke så meget øget sekretion af enzymet som dets sekundære absorption fra abdominale organer ind i blodet. For at differentiere diagnosen udføres bestemmelsen af ​​alfa-amylase og kreatinin i urinen og beregningen af ​​kreatininclearance ved anvendelse af ovenstående formel. Med en konstant værdi af clearance fra 1 til 4%, bør det være mistanke om sygdomme i abdominale organer, der maskerer som akut pancreatitis.

Af samme grund øges alfa-amylaseaktiviteten signifikant med spiserør perforering, gastritis, akut intestinal obstruktion, iskæmi og tarmtarminfarkt, tubal ruptur, salpingitis, aorta-aneurisme.

I sygdomme i indre organer, der ikke er direkte forbundet med fordøjelsessystemet, er en moderat stigning i aktiviteten af ​​total alfa-amylase og / eller dets isoenzymer mulig. Sådanne sygdomme indbefatter: cholecystitis, cholelithiasis, skade på nyrens parenchyma og inflammatoriske sygdomme i dette organ, nyresvigt, prostatitis, diabetisk ketoacidose, metastaser af maligne tumorer i væv og organer (især i lungerne, bugspytkirtlen, tværgående tyktarm). Hvis de ovenfor beskrevne patologier mistænkes, udføres en sammenlignende analyse af total og pankreatisk alfa-amylase, da isoenzymets sygdomme hovedsageligt stiger i de beskrevne sygdomme (den onkologiske skade på bugspytkirtlen og tværgående tyktarm øger aktiviteten af ​​både P- og S-isoenzymerne, hvilket gør det muligt at skelne fra inflammatoriske sygdomme i de samme organer).

Hyperamalasæmi af ikke-pancreatisk oprindelse forekommer også i sygdomme i spytkirtlerne og visse hjernepatologier. I dette tilfælde forekommer en stigning i total alfa-amylaseaktivitet også på grund af en stigning i salivarisoenzymets aktivitet, og for at differentiere diagnosen skal der foretages en parallel måling af total og pankreatisk alfa-amylase (med normal aktivitet af P-amylase kan den ovennævnte patologi blive mistanke).

Sammenligningsanalyse af alfa-amylaseaktiviteten i urin og serum er også en værdifuld diagnostisk parameter ved vurderingen af ​​nyrepatologi. Når nyrfiltrering er svækket (i nefrotisk syndrom, glomerulonefritis osv.) Reduceres aktiviteten af ​​alfa-amylase i urinen kraftigt, mens moderat eller signifikant hyperamlazæmi er noteret i blodet, derfor er koefficienten for serumamylase / urinamylase en af ​​de vigtigste diagnostiske parametre med denne patologi.

Postoperative tilstande (systemisk inflammatorisk reaktion på kirurgi, udvikling af ARDS osv.) Kan også forårsage moderat hyperamylasæmi.

Et fald i aktiviteten af ​​alfa-amylase følger sædvanligvis et fald i den funktionelle aktivitet i bugspytkirtlen forårsaget af skade på parankymen af ​​orglet og / eller nedsat eksokrine regulering og forekommer hyppigst, når:

Nekrotiske forandringer i bugspytkirtlen forbundet med hæmoragisk pankreatitis og total pankreatisk nekrose.

Med leversygdomme (hepatitis, cirrose). Maligne tumorer, især i levermetastase.

Alvorlig endokrin ubalance: hypothyroidisme, diabetes mellitus, hyperlipæmi (især med et overskud af triacylglycerider på grund af hæmning af det enzymaktive center) med en generel ernæringsforstyrrelse, cachexi og toksikose hos gravide kvinder.

I nogle tilfælde kan serumaktiviteten af ​​a-amylase med de ovenfor beskrevne patologier ikke falde, men forbliver uændrede.

De vigtigste forhold i differentialdiagnosen af ​​patologier med lignende symptomer.

De mest almindelige forhold er:

Samlet alfa-amylase / pancreas-komponent. Anvendes i differentialdiagnosen af ​​inflammatoriske og ondartede processer i abdominale organer og nogle andre væv. I inflammatoriske processer, der ikke påvirker bugspytkirtlen, er hovedaktiviteten af ​​total alfa-amylase spyt enzym, derfor forholdet "Total amylase / pankreatisk isoform"> 1. Ved ondartet skade på abdominale organer er bidraget fra begge isoenzymer omtrent det samme, og denne koefficient er omtrent lig med 1, 8-2,4. Ved involvering af bugspytkirtlen i den inflammatoriske proces eller i nærværelse af tumormetastaser i den, overstiger forholdet mellem total og pancreatisk amylaseaktivitet ikke 1,5.

Total alfa-amylase / kreatinin i urin og serum. Den beregnede clearance anvendes (formlen er angivet i afsnit 3), gør det muligt at differentiere inflammatorisk proces i bugspytkirtlen (forholdet overstiger 6%) og abdominale organer (1-4%).

Samlet serum alfa-amylase / Total urin alfa-amylase. Anvendes til vurdering af den funktionelle aktivitet af nyrfilteret. I nefrotisk syndrom og glomerulonephritis er koefficienten højere end 2-2,5.

Samlet serum alfa-amylase / Serum Triglycerider. Forholdet er "invers", da et overskud af triacylglycerider kan hæmme aktiviteten af ​​alfa-amylase. Det gør det muligt at differentiere det patologiske fald i enzymproduktionen og interferensen med hyperipmi.

Samlet serum alfa-amylase / pankreatisk lipase. Den biologiske og diagnostiske betydning af koefficienten svarer til den for det foregående forhold, da tilstedeværelsen af ​​frie triacylglycerider i serum er direkte relateret til aktiviteten af ​​pankreatisk lipase. Andelen er direkte.

Ændringer i alfa-amylases aktivitet hos raske mennesker. Interferens med stoffer.

Aktiviteten af ​​alfa-amylase i blodplasma hos raske mennesker afhænger i høj grad af diætets art og de fødevarer, der råder over i kosten. Desuden er denne parameter stærkt afhængig af intensiteten af ​​metaboliske processer i et bestemt individ, såvel som på fagets hjerneaktivitet. Derfor kan enzymets aktivitet i det samme individ på forskellige tidspunkter (selv på samme dag) variere i intervallet 25-50% i begge retninger.

Hyperamylasæmi hos raske mennesker kan skyldes en følelsesmæssig tilstand (stress, øget mental aktivitet), alkohol (engang en gang) og er også forbundet med en diæt rig på protein og udarmet i kulhydrater og sukkerarter. Hypoamylasæmi forekommer med en stigning i glukoseudnyttelse med fastende, aktiv træning, såvel som hos personer med hyperlipidæmi, selv i mangel af kliniske manifestationer.

Under graviditet i op til 19 uger sænkes alfa-amylaseaktiviteten sammenlignet med normen, hvad angår op til 33-34 ugers svangerskab, øges aktivitetsniveauet og ved 37-40 uger stabiliseres det på et niveau 10-20% højere end enzymaktiviteten hos raske ikke-gravide kvinder.

Aktiviteten af ​​alfa-amylase og dens pancreatiske isoenzym er også signifikant påvirket af brugen af ​​en række almindelige lægemidler, der anvendes af praktisk sunde mennesker i tilfælde af forbigående infektiøse og inflammatoriske sygdomme - f.eks. Tetracyclin-antibiotika, furosemid, kortikosteroid-antiinflammatoriske lægemidler, salicylater.

En betydelig indvirkning på alfa-amylaseaktiviteten har også lægemidler, der fører til en reduktion af Oddi-sfinkteren, herunder hormoner (adrenalin, histamin, sekretin), narkotiske stoffer (morfin, pantopon, opium, codein) og andre lægemidler, som øger enzymets udskillelse og undertrykke udstrømningen af ​​sekretion fra bugspytkirtlen.

Baseret på biofile.ru

Metodeprincip: Maltotriosid forbundet med kromogen 2-chlor-p-nitrophenol anvendes som et substrat for a-amylase. Under a-amylase-virkningen hydrolyseres substratet for at frigive farvet 2-chlor-p-nitrophenol, maltotriose og glucose. Reaktionen forløber hurtigt og kræver ikke tilstedeværelse af coenzymer i reaktionsblandingen. Hastigheden af ​​substrathydrolyse er direkte proportional med aktiviteten af ​​a-amylase i prøven og måles spektrofotometrisk ved en bølgelængde på 405 nm.

Substrate-CNF ----> CNF + Glucose + Maltotriose

Linearitet af metoden: op til 1500 U / l.

a-amylase i ikke-hemolyseret serum forbliver stabilt ved stuetemperatur (18-25 ° C) i 7 dage ved en opbevaringstemperatur på 2-8 ° C i 2 måneder.

1) Et spektrofotometer med en temperaturstyret kuvette, en bølgelængde på 405 nm, en optisk sti længde på 1 cm; reaktionstemperatur 37 ° C;

3) Automatiske pipetter til 25 μl og 1000 μl;

Spytvæske kan også bruges som en kilde til enzym (spyt er tidligere fortyndet med destilleret vand 100 gange), men rækkevidden af ​​norm varierer meget.

6) Arbejdsreagens (substrat - 1,8 mmol / l i MES-buffer (pH 6,0 ± 0,1)).

Arbejdsreagenset er egnet til brug, hvis dets optiske densitet ikke er højere end 0,6 enheder med optisk densitet. ved en bølgelængde på 405 nm og der er ingen turbiditet.

Før analysen skal reagenser opvarmes til målingstemperaturen (37 ° C).

Rør indholdet af røret og tænd stopuret. Mål den optiske densitet af prøven mod destilleret vand i en længde på 405 nm i nøjagtigt 1 minut. Gentag målingen 3 gange med et interval på 1 min. Beregn forandringen i optisk densitet pr. Minut, og bereg derefter den gennemsnitlige måling af optisk tæthed pr. Minut (Dop / min).

Beregningen af ​​aktiviteten af ​​a-amylasefaktor udført med formlen:

hvor Dop / min er den gennemsnitlige ændring i optisk tæthed pr. minut;

1,025 - totalvolumenet af opløsningen i kuvetten

1000 er konverteringsfaktoren ml til 1;

12,9 - millimolær absorptionskoefficient for 2-chlor-p-nitrophenol;

0,025 er volumenet af serum i ml;

1,0 er den optiske sti længde.

Når der foretages ændringer i de angivne parametre, skal faktoren omregnes. Hvis aktiviteten af ​​a-amylase overstiger 1500 U / l (et punkt uden for linearitetsgraden af ​​kalibreringsgrafen), skal det analyserede serum fortyndes 1: 1 med en saltopløsning, og målingerne gentages, og resultatet af beregningen multipliceres med 2.

Klinisk og diagnostisk værdi: a-Amylase er en endohydrolase, og i den menneskelige krop er repræsenteret af flere isoenzymer: enzymet udskilles af spytkirtel (S-type), pancreas (P-type); lille enzymaktivitet findes i lever, skeletmuskel, tårevæske, udskillelse af brystkirtlerne og forskellige tumorer.

Aktiviteten af ​​a-amylase i serum stiger signifikant på grund af P-isoenzymet i forskellige sygdomme i bugspytkirtlen (pancreatitis, abscess, traume, kræft).

Med skader på spytkirtlerne (spytkirtelkræft, endemisk parotitis, makroamylasæmi) øges serum a-amylaseaktiviteten, men på bekostning af S-isoenzymet.

Begge a-amylase isoenzymer har en lille molekylvægt (45.000), så de filtreres i nyrerne og udskilles i urinen. En stigning i aktiviteten af ​​urinamylase (diastase) ved akut pancreatitis forekommer 6-10 timer senere end i blodserum.

Baseret på biohimist.ru

Princippet om metoden. Alfa-amylase katalyserer hydrolysen af ​​et uopløseligt farvet stivelsessubstrat til dannelse af et blåt vandopløseligt farvestof. Mængden af ​​frigivet farvestof er proportional med enzymets aktivitet.

Forløbet af beslutsomhed. For at bestemme aktiviteten af ​​alfa-amylase i serum eller urin fremstilles parallelle eksperimentelle og kontrolprøver og analyseres i følgende rækkefølge:

Prøver blandes, henstår til henstand i 15 minutter, centrifugeres ved 3000 omdr./min. I 5 minutter. Derefter måles den optiske densitet af den eksperimentelle prøve mod kontrollen ved FEC ved en bølgelængde på 590 nm i kuvetter med en lagtykkelse på 5,0 mm.

Aktiviteten af ​​enzymet findes på kalibreringsplanen.

Klinisk og diagnostisk værdi ved bestemmelse af alfa-amylaseaktivitet i serum og urin: hos mennesker udskilles alfa-amylase af bugspytkirtlen og spytkirtlerne. Den lille aktivitet findes i levervæv og skeletmuskler. Molekylvægten af ​​enzymet er relativt lavt ("48.000), så det filtreres i glomeruli i nyrerne og er indeholdt i urinen.

Hos raske mennesker er serum enzymaktivitet fra 140 til 350 U / l, i urin fra 1000 til 2000 U / l. Amylaseaktivitet øges hovedsageligt i sygdomme i bugspytkirtlen (ved akut pankreatitis). Sygdomme i spytkirtlerne og kroniske nyresygdomme medfører en stigning i aktiviteten af ​​serum-alfa-amylase.

Arbejdsnummer 5. Virkningen af ​​adrenalin på glukose i blodet.

Fremskridt i arbejdet. I en kanin, fra øreens marginale ader eller i en rotte fra kaudalvenen, opsamles 0,1 ml blod, og blodglukosen bestemmes af o-toluidinmetoden.

Derefter har dyret skåret på sin side, gnider huden med alkohol, og 0,1% opløsning af adrenalin tages subkutant med en hastighed på 0,1 ml pr. 1 kg vægt, og efter 30 minutter måles blodglukosen igen.

Arbejdsnummer 6. Virkningen af ​​insulin på blodsukker.

Fremskridt i arbejdet. Fra en anden kanin fra øreens marginale vene eller fra en rotte fra kaudalvenen, skal du tage 0,1 ml blod og bestemme glukoseniveauet i blodet.

I dyret skar man pelsen på sin side, behandler den med alkohol og injicerer subkutant insulin med en hastighed på 1,5 internationale enheder pr. Kg vægt. En time senere bestemmes blodglukosen igen. Indfør dyret subkutant med 5% glucoseopløsning for at forhindre insulinchok: kanin 10 ml, rotte - 1 ml.

Resultaterne fra 3. og 4. arbejder til bordet og trækker konklusioner.

Baseret på materialer www.ronl.ru

a - Amylase (diastase, 1,4 - a - D - glucanhydrolase, EC 3.2.1.1.) katalyserer hydrolysen af ​​a - 1,4 - glucosidbindinger af stivelse, glycogen og deres beslægtede polysaccharider til maltose, dextriner og andre polymerer. Enzymernes molekylvægt er ca. 48.000 D. Molekylet indeholder et calciumatom, som ikke alene aktiverer enzymet, men beskytter det også mod proteasernes virkning, og amylaseaktiviteten øges med indflydelse af chlorioner. I blodet er det repræsenteret af to isoenzymer: pankreas - P-type og spytkirtel - S-type, som hver er opdelt i flere fraktioner. S-type isoenzym er generelt 45-70% (i gennemsnit 57%), resten er i P-typen. Begge isoenzymer har næsten identiske katalytiske og immunologiske egenskaber, afviger lidt i elektroforetisk mobilitet, men skilles godt fra ved gelfiltrering på DEAE - Sephadex. Der er også makroamylase, som ikke udskilles af nyrerne, men kan findes i normalt blodserum (ca. 1% af raske mennesker) og patologi (2,5%).

Høj amylaseaktivitet observeres i parotid og pankreas. Imidlertid findes dens aktivitet, selv om den er meget lavere, i de store og tyndtarm, skeletmuskler, lever, nyrer, lunger, æggeleder, fedtvæv. I blodet er enzymet forbundet med både plasmaproteiner og dannede elementer. Enzymeaktiviteten er den samme for mænd og kvinder og afhænger ikke af arten af ​​den taget mad og tidspunktet på dagen.

Eksisterende metoder til at studere aktiviteten af ​​a-amylase i biologiske væsker er opdelt i to store grupper:

1. Saccharifying (reduktometrisk), baseret på undersøgelsen af ​​sukkerne dannet af stivelse med den reducerende virkning af glucose og maltose.

2. Amyloklastisk, baseret på bestemmelse af resten af ​​uklart stivelse:

• i henhold til intensitetsgraden af ​​dens reaktion med iod. Disse metoder er mere følsomme og specifikke, men deres nøjagtighed afhænger i høj grad af stivelsens kvalitet og optimeringen af ​​bestemmelsesbetingelserne.
• viskositetssuspension af stivelse, har ikke høj nøjagtighed og anvendes ikke nu.

3. Metoder, der anvender kromogene substrater - er baseret på anvendelse af substrat-farvestofkomplekser, som under a-amylases virkning desintegreres til dannelse af et vandopløseligt farvestof.

4. Metoder baseret på koblede enzymatiske reaktioner:

Stivelse + H₂Om Maltose + Maltotriose + Dextrin

Maltose + N₂Ca. 2 Glucose

Glucose + ATP Glucose - 6 - F + ATP

Glucose-6-F + NADF-gluconat-6-F + NADFN

Aktiviteten af ​​enzymet bestemmes af akkumulationshastigheden af ​​NADPH.

To amyloklastiske metoder blev godkendt som forenet: Karavey (med resistent stivelsessubstrat) og Smith-Rohe.

a - Amylase katalyserer hydrolysen af ​​et uopløseligt farvet stivelsessubstrat til dannelse af et blåt vandopløseligt farvestof. Mængden af ​​frigivet farvestof er proportional med enzymets katalytiske aktivitet.